细胞培养实验室由六个部分组成:无菌操作区、孵化区、制备区、储存区、清洁消毒区。这些区域的共同特点是房间要宽敞明亮,路面要方便清洁防滑,墙体材料要光滑坚硬,仪器设备布局合理,操作方便,防止交叉干扰,陈设简单,清洗方便。
无菌操作区
无菌作业区仅限于细胞培养等无菌作业区,最好与外界隔离,不要穿梭或受其他影响。在一般环境下的空气中,由于灰尘和霉菌较多,容易造成污染。
所以,接种工作要在气体经过消毒的环境中进行,小规模的无菌环境可以通过超净工作台创造,大规模的无菌室需要建造。
理想的无菌操作室应分为三个部分:
a) 更衣间―换衣服,换鞋,戴帽子,换口罩。
b) 缓冲间―位于更衣室和操作室之间,用于准备工作,具有防治污染的作用,保证操作室的无菌环境,同时可以放置恒温培养箱和必要的小型仪器。
c) 无菌操作间―无菌操作室专门用于无菌操作和细胞培养,其尺寸应适当,顶部不宜过高,以保证紫外线的杀菌效果;为了清洁和消毒,墙壁光滑无死角。无菌操作室容量小且封闭。一般来说,紫外线灯用于无菌操作室的空气消毒,一些实验室使用无臭氧紫外线消毒器或电子消毒灭菌器。
净化工作台:操作简单,安装方便,占用空间小,净化效果好。一般细菌培养室使用的净化工作台主要有两种:a)侧流式或垂直式 b)外流式或水平层流式。
孵育区
孵化区也叫培养区。虽然这个地区对无菌的需求不比无菌地区严格,但仍然需要清洁和清洁,因此也应该设置在影响较小而不是来来往往的地区。孵化可以在孵化器或可控温度的温室中进行,后者成本高。一般实验室大多使用孵化器进行工作。
制备区
制备区主要制备培养液和培养液。应配备试剂柜、设备柜、试验台、上水道、电源等。配备水净化设备、天平、微波炉、pH计等主要仪器设备。、泵、电炉、培养分装器、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、量杯、量筒、容量瓶等。
有天平,pH计、制备完成后,磁力搅拌器等设备应在无菌控制台上进行过滤和杀菌。液体制备直接影响组织细胞养殖的成败,因此必须严格进行无菌操作。
储藏区
储藏区主要储存各种冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等。这种环境也需要清洁和清洁。为了储存细胞,特别是不易获得的突变细胞或细胞株,应冷冻细胞。冷冻温度一般为液氮-196℃。
细胞冷冻过程需要一系列程序来降低温度,一般为4。 30min在℃下存放。转让-20 ℃ 1 h,然后转到-80-70℃过夜,然后转移到液氮(-196℃)。所以储藏区必须配备冰箱、低温冰箱、超低温冰箱、液氮罐等设施。
清洁和消毒灭菌区域
清洁和消毒灭菌区域应与其他区域分离,主要用于清洁、准备、消毒和制备所有细胞培养容器的三蒸水。应配备高压蒸汽灭菌锅、细菌过滤设备、电热干燥箱、消毒柜和排气设备。